服務介紹

FISH（fluorescence in situ hybridization）：一種非放射性原位雜交技術(shù)。通過設計同源互補的雙鏈DNA探針（可標記生物素、地高辛和熒光CY3/FITC），二者經(jīng)變性－退火－復性，即可結(jié)合到靶核酸上，再通過間接免疫化學反應或直接熒光檢測，對mRNA、lncRNA、circRNA和miRNA進行定性、半定量或定位分析的一種實驗方法。

免疫熒光（IF）：以熒光物質(zhì)標記抗體而進行抗原定位的技術(shù)。用于檢測或定位細胞或者組織中目的蛋白。

吉賽生物可提供

1. 基因或蛋白單獨定位檢測；

2. 基因與基因共定位檢測；

3. 基因與蛋白共定位檢測；

4. 蛋白與蛋白共定位檢測。

技術(shù)優(yōu)勢

1. 安全、快速、重復性好；

2. 特異性100%，靈敏度超過90%；

3. 探針性能穩(wěn)定，可低溫保存1年以上；

4. 熒光信號強，結(jié)果判定直觀可靠；

5. 操作簡單，定位精準，無實驗污染。

客戶提供

1. 基因名稱（ID）、長度、序列、物種（mRNA、LncRNA指定具體轉(zhuǎn)錄本、miRNA指定5p或者3p）；

2. 合成好的探針或者指定標記探針方法（地高辛/生物素/CY3/FITC）；

3. 新鮮或者固定好的組織或細胞樣本，石蠟切片，冰凍切片以及細胞爬片，涂片；

4. 一抗及一抗信息。

我們提供

1. 探針；

2. 探針序列報告；

3. 基因單獨/共定位檢測報告。

案例1：

2021年2月18日，廣東醫(yī)科大學徐軍發(fā)教授和美國University of Illinois College of Medicine的Zheng W. Chen教授作為通訊作者在Clinical & Translational Immunology雜志上發(fā)表了一篇題為“Circular RNA TRAPPC6B inhibits intracellular Mycobacterium tuberculosis growth while inducing autophagy in macrophages by targeting microRNA-874-3p”的文章，揭示了環(huán)狀RNA TRAPPC6B通過靶向miR-874-3p調(diào)控巨噬細胞自噬，發(fā)揮抗結(jié)核固有免疫的功能。

圖1：miR-874-3p被確定為circTRAPPC6B的靶標

本研究中，通過circinteractome，miRDB和RegRNA2三個工具預測分析表明miR-874-3p是circTRAPPC6B可能結(jié)合的miRNA。FISH分析發(fā)現(xiàn)circTRAPPC6B和miR-874-3p主要分布于巨噬細胞胞質(zhì)，且存在共定位。雙熒光素酶報告基因檢測，RNA pull down實驗分析進一步確認了circTRAPPC6B和miR-874-3p的結(jié)合。[1]

案例2：

圖2：FISH 分析 hsa_circ_0004872 和 miR-224 在 GC 細胞中的亞細胞定位

在本研究中，FISH 分析顯示 hsa_circ_0004872 與 miR-224 共定位在 胃癌（GC） 細胞的細胞質(zhì)中。結(jié)合雙熒光素酶報告基因分析證實了 hsa_circ_0004872 和 miR-224 在 GC 細胞中的共定位和相互作用。并進一步通過其它多項實驗證明hsa_circ_0004872 通過形成由 hsa_circ_0004872/miR-224/Smad4/ADAR1 組成的負調(diào)控環(huán)，在 胃癌（GC） 中充當腫瘤抑制因子。[2]

參考文獻：

[1] Luo HL, Pi J, Zhang JA, Yang EZ, Xu H, Luo H, Shen L, Peng Y, Liu GB, Song CM, Li KY, Wu XJ, Zheng BY, Shen HB, Chen ZW, Xu JF. Circular RNA TRAPPC6B inhibits intracellular Mycobacterium tuberculosis growth while inducing autophagy in macrophages by targeting microRNA-874-3p. Clin Transl Immunology. 2021 Feb 18;10(2):e1254.

[2] Circular RNA hsa_circ_0004872 inhibits gastric cancer progression via the miR-224/Smad4/ADAR1 successive regulatory circuit. Mol Cancer. 2020 Nov 10; 19: 157.