服務介紹

Polysome profiling 實驗，是利用核糖體沉降系數較大的特性，用蔗糖密度梯度離心的方法分離多聚核糖體。由于核糖體是細胞里密度最高的生物大分子，一條 mRNA 上結合的核糖體越多，在蔗糖密度梯度離心時的沉降速率越快，因此結合不同數量核糖體的mRNA 通過離心在溶液中會被分開。離心結束后將蔗糖溶液由底部緩慢抽出，即可對結合有不同數量核糖體的組分進行分離，可以直觀地反映細胞內翻譯的狀態。

實驗流程方法

Polysome profiling 是一種翻譯組學的研究方法，其操作流程為先用放線菌酮或氯霉素處理樣本，然后裂解細胞，離心并取上清液，之后將上清液轉移至蔗糖梯度上進行超離。最后，進行核糖體檢測及分離。研究人員可根據實驗需要，繼續做 PCR 定量分析、蛋白質提取等實驗。

Polysome profiling實驗流程概要（source：Su D, et al., 2024）

技術應用

① 準確檢測蛋白翻譯效率；

② 分析目標RNA降解、翻譯起始和抑制等機制，研究翻譯調控與基因表達；

③ 挖掘潛在翻譯的非常規RNA，如lncRNA、circRNA的翻譯。

技術優勢

① 直觀反映翻譯狀態：Polysome profiling技術能夠直觀地反映細胞和組織內的翻譯狀態，通過分析不同組分中mRNA的分布，可以了解特定mRNA的翻譯活躍程度；

② 有助于理解翻譯動態變化：Polysome profiling能夠檢測翻譯中發生巨大變化的RNA，結合測序技術，有助于理解在不同生理或病理狀態下翻譯動態的變化。

升級版Polysome profiling plus服務內容

①增加組分：基礎版Polysome profiling可根據沉降系數大小，把核糖體-RNA復合物分離成5個組分，而升級版Polysome profiling提供共18個分離的組分，可增加RT-qPCR數據點，繪制更詳細的翻譯動態折線圖，更精準反映翻譯活性的動態變化；

②增加RNA質控：檢測RNA完整性，確保下游的分析。如送樣不均衡，可根據質檢結果進行相對等量上機(但不一定準，因為復合物含核酸和核糖體、蛋白等)

③能處理的樣本類型增多：包括細胞、組織、細菌、真菌菌體等。

④統計AUC值：P/non-P ratio常用于表征樣品整體的翻譯活性

吉賽翻譯組技術服務內容

                                                                   Polysome Profiling圖譜示例

升級版Polysome profiling提供AUC值統計（P/non-P ratio），常用于表征樣品整體的翻譯活性

例：

Polysome profiling原始樣本送樣建議

*具體處理、保存和運輸方法請咨詢技術支持。

物種范圍：請咨詢銷售或技術支持