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RNA過表達(dá)

合成生物學(xué)

RNA合成

DNA合成

環(huán)狀單鏈DNA體外合成

LNP包封

LNP包封

測序及質(zhì)譜

三代ONT

單細(xì)胞組

空間組

空間轉(zhuǎn)錄組測序

高通量藥篩

DRUG-seq

轉(zhuǎn)錄組

翻譯組

表觀組

基因組

蛋白組

蛋白組質(zhì)譜

代謝組

代謝組質(zhì)譜

分子生物學(xué)

引物/探針/siRNA

定位分析

RNA、蛋白定位

載體構(gòu)建

病毒包裝

分子互作

circRNA整體研究解決方案

翻譯組研究解決方案

表觀調(diào)控研究解決方案

多組學(xué)及組學(xué)聯(lián)合研究解決方案

外泌體研究解決方案

RNA過表達(dá)

在線訂購

產(chǎn)品介紹
案例解析
結(jié)果展示
FAQ

服務(wù)介紹

RNA作為生物體內(nèi)的遺傳信息載體，根據(jù)結(jié)構(gòu)和功能的不同分為信使RNA（Messenger RNA，mRNA）和非編碼（Non-coding RNA，ncRNA），在基因調(diào)控層面，這些RNA分子起到了至關(guān)重要的作用。

吉賽生物研發(fā)的第五代RNA過表達(dá)載體可對mRNA/lncRNA/circRNA分子實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)表達(dá)，能滿足普通真核表達(dá)、慢病毒包裝和腺相關(guān)病毒（AAV）包裝和Fluc熒光檢測等多種用途。其中circRNA載體均攜帶優(yōu)化過的側(cè)翼成環(huán)框架，含有精心改造的Alu元件、QKI等RBP的結(jié)合位點(diǎn)，并使用全新設(shè)計(jì)的環(huán)化介導(dǎo)序列，使插入的circRNA準(zhǔn)確高效環(huán)化，mRNA及l(fā)ncRNA表達(dá)載體攜帶強(qiáng)啟動子及KOZAK序列，使mRNA/lncRNA精準(zhǔn)正確表達(dá)。

過表達(dá)分子類型	載體名稱	抗性	熒光標(biāo)記	應(yīng)用
				瞬轉(zhuǎn)細(xì)胞	包裝慢病毒	包裝腺相關(guān)AAV病毒
circRNA	pCD5-ciR	AmpR	無	√	×	×
	pCD25-ciR	AmpR	eGFP	√	×	×
	pLO5-ciR	AmpR/PuroR	無	√	√	×
	pLC5-ciR	AmpR/PuroR	eGFP	√	√	×
	pK5ssAAV-ciR	AmpR	無	√	×	√
	pK25ssAAV-ciR	AmpR	eGFP	√	×	√
	pLu5-ciR	AmpR/PuroR	Fluc	√	√
	pK25ussAAV-ciR	AmpR	Fluc	√		√
mRNA&lncRNA	pCDNA3.1	AmpR	無	√	×	×
	pCDH	AmpR	eGFP	√	√	×
	ssAAV.CMV.EGFP.WPREs	AmpR	eGFP	√	×	√
	scAAV-luc	AmpR/PuroR	Fluc	√		√
	pCDH-luc	AmpR	Fluc	√

技術(shù)優(yōu)勢

1. 過表達(dá)效率高；

2. 特異性強(qiáng)、準(zhǔn)確率高：優(yōu)化篩選過的表達(dá)元件有效保證目標(biāo)RNA分子的序列準(zhǔn)確表達(dá)；

3. 穩(wěn)定性高：mRNA、lncRNA（100-3000nt序列）；circRNA（200-2500nt序列）均能實(shí)現(xiàn)準(zhǔn)確高效過表達(dá)；

4. 適用范圍廣：可用于細(xì)胞轉(zhuǎn)染、包裝慢病毒或腺相關(guān)病毒，同時可提供GFP綠色熒光蛋白標(biāo)記和嘌呤霉素抗性基因標(biāo)記，適用于客戶不同的實(shí)驗(yàn)需求。

服務(wù)流程

1. 載體構(gòu)建；

2. 瞬時轉(zhuǎn)染；

3. 特異性引物設(shè)計(jì)合成；

4. RT-qPCR驗(yàn)證；

5. Sanger測序驗(yàn)證；

6. 病毒包裝（可選，列于病毒包裝項(xiàng)目）

客戶提供

1. 基因ID/物種/全長序列

2. 載體名稱

我們提供

1. 目的載體：10μg質(zhì)粒+200μL甘油菌/對照載體：10μg質(zhì)粒+200μL甘油菌；

2. 載體構(gòu)建與驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

①　載體構(gòu)建步驟；

②　載體測序驗(yàn)證結(jié)果原始文件；

③　細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)步驟；

④　qPCR實(shí)驗(yàn)流程方案及產(chǎn)物測序；

⑤　載體構(gòu)建與驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)報(bào)告。

案例1：

2020年9月14日，中山大學(xué)孫逸仙紀(jì)念醫(yī)院蘇士成教授合作團(tuán)隊(duì)在Cell雜志（IF 41.584)上發(fā)表了題為Targeting Mitochondria-Located circRNA SCAR Alleviates NASH via Reducing mROS Output的文章，該文章應(yīng)用Arraystar Human CircRNA芯片篩選鑒定出與非酒精性脂肪性肝炎發(fā)生相關(guān)的環(huán)狀RNA分子SCAR，并發(fā)現(xiàn)在線粒體中過表達(dá)circRNA SCAR能夠抑制肝臟成纖維細(xì)胞的活化與相應(yīng)的炎癥反應(yīng)，敲低則有相反的表型。并且作者使用吉賽公司過表達(dá)載體 pcD-ciR 通過插入3×flag標(biāo)簽以及預(yù)測的ORF序列（圖1），發(fā)現(xiàn)circRNA SCAR無法編碼蛋白質(zhì)，隨后作者通過一系列實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)該circRNA能夠直接與ATP5B結(jié)合并發(fā)揮生物學(xué)功能[1]。作者團(tuán)隊(duì)發(fā)現(xiàn)了線粒體circRNA的重要功能并發(fā)展了一系列相關(guān)的實(shí)驗(yàn)方法，為免疫代謝疾病提供了一種有吸引力的治療策略。

參考文獻(xiàn)：
Qiyi Zhao, Jiayu Liu, Hong Deng, et al. Targeting Mitochondria-Located circRNA SCAR Alleviates NASH via Reducing mROS Output.Cell (2020), https://doi.org/10.1016/j.cell.2020.08.009

案例2：

參考文獻(xiàn)：
Song R, Ma S, Xu J, Ren X, Guo P, Liu H, Li P, Yin F, Liu M, Wang Q, Yu L, Liu J, Duan B, Rahman NA, Wo?czyński S, Li G, Li X. A novel polypeptide encoded by the circular RNA ZKSCAN1 suppresses HCC via degradation of mTOR. Mol Cancer. 2023 Jan 23;22(1):16. doi: 10.1186/s12943-023-01719-9. PMID: 36691031; PMCID:PMC9869513.
qRT-PCR檢測
圖1 hsa_circ_00AAAAA的相對表達(dá)差異

表1 hsa_circ_00AAAAA的相對表達(dá)量

qPCR產(chǎn)物測序結(jié)果：

$C:\Users\Administrator\AppData\Roaming\Tencent\Users\1986877090\TIM\WinTemp\RichOle\@CET3]4$1[I3IG~$JO]3J42.png$
注：hsa_circ_00AAAAA在circBase中的環(huán)化位點(diǎn)序列GATTATGGAAACAGCTTTTTATAACTATGATG

結(jié)論：
相比于對照組，CAAAAA組的過表達(dá)倍數(shù)為***；PCR產(chǎn)物測序峰圖正常，無雜峰或疊帶，序列與環(huán)化位點(diǎn)參考序列對比吻合。以上結(jié)果表明CAAAAA能在真核細(xì)胞中成功過表達(dá)目的hsa_circ_00AAAAA。
1. circRNA過表達(dá)怎么做？
CircRNA的形成和線性RNA不同，因此對circRNA的過表達(dá)不能直接將序列連接到常規(guī)的真核表達(dá)載體（如pcDNA3.1）來進(jìn)行。已明確的circRNA形成依賴于側(cè)翼序列中的反向互補(bǔ)序列（RCMs，如Alu元件）或與能調(diào)控circRNA生成的蛋白（如QKI）的結(jié)合位點(diǎn)，因此構(gòu)建載體時可以在circRNA序列上下游分別增加一段反向互補(bǔ)的序列，質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞后會先轉(zhuǎn)錄出上游+circRNA+下游的線性RNA鏈，再依靠長下游的反向互補(bǔ)配對促使成環(huán)。

2. circRNA過表達(dá)成功標(biāo)準(zhǔn)？
載體構(gòu)建好后瞬時轉(zhuǎn)染細(xì)胞進(jìn)行RT-PCR檢測以驗(yàn)證過表達(dá)效率。
1）qPCR檢測有過表達(dá)倍數(shù)，質(zhì)粒瞬轉(zhuǎn)效率高，基因本底豐度不太高的話一般都可以過表達(dá)50倍以上；
2）使用Divergent引物檢測過表達(dá)的PCR產(chǎn)物是大小正確的單一條帶，PCR產(chǎn)物進(jìn)行sanger測序確定成環(huán)序列準(zhǔn)確。滿足這兩個條件才可以認(rèn)為載體實(shí)現(xiàn)了對circRNA的準(zhǔn)確高效率過表達(dá)。