轉(zhuǎn)錄組測(cè)序這么發(fā)達(dá)，為什么還要做Polysome？

因?yàn)椤奥?tīng)到的”不等于“做到的”。

轉(zhuǎn)錄組告訴你細(xì)胞“想”做什么（mRNA水平），而翻譯組告訴你細(xì)胞“正在”做什么（蛋白合成水平）。

研究表明，轉(zhuǎn)錄組和蛋白組的變化往往不一致。特別是在以下場(chǎng)景中，Polysome Profiling是無(wú)可替代的：

應(yīng)激反應(yīng)（Stress）：缺氧、藥物刺激時(shí)，細(xì)胞來(lái)不及轉(zhuǎn)錄新RNA，而是直接調(diào)控現(xiàn)有RNA的翻譯效率。

病理機(jī)制（Pathology）：致病蛋白的過(guò)量表達(dá)，往往源于翻譯起始的異常激活，而非轉(zhuǎn)錄增加。

只有通過(guò)Polysome Profiling計(jì)算翻譯效率（TE），你才能解釋為什么mRNA沒(méi)變，蛋白卻變了。

這個(gè)技術(shù)原理是不是很復(fù)雜？

原理極其優(yōu)雅簡(jiǎn)單——“以重取勝”。

想象mRNA是一條生產(chǎn)流水線，核糖體是工人在上面裝配蛋白。

工效低：流水線上只有一個(gè)工人（單核糖體/80S），甚至沒(méi)工人（游離RNA）。

工效高：流水線上擠滿了工人（多聚核糖體/Polysome）。

根據(jù)“結(jié)合核糖體越多，復(fù)合物越重”的物理特性，利用蔗糖密度梯度超速離心，就能把它們分離開(kāi)。通過(guò)分析RNA到底是在“單人區(qū)”還是“多人區(qū)”，就能精準(zhǔn)判斷基因的翻譯活性。

聽(tīng)說(shuō)這實(shí)驗(yàn)很簡(jiǎn)單，自己實(shí)驗(yàn)室就能做？

原理懂了，實(shí)操卻是“勸退級(jí)”難度。

很多同學(xué)覺(jué)得：“不就是配個(gè)蔗糖溶液離心嗎？”

錯(cuò)！但不全錯(cuò)。

這個(gè)實(shí)驗(yàn)的門(mén)檻在于“又大又細(xì)”：

設(shè)備門(mén)檻高：你需要大型超速離心機(jī)（連續(xù)轉(zhuǎn)數(shù)小時(shí)）和專(zhuān)用的密度梯度分餾系統(tǒng)（含UV檢測(cè)和流量泵），一般實(shí)驗(yàn)室很難配齊。

操作容錯(cuò)低：梯度溶液配置繁瑣，且必須在裂解液中加入放線菌酮（CHX）“鎖住”核糖體。一旦操作不當(dāng)，多聚核糖體解聚，跑出來(lái)的圖譜就是一堆雜亂的峰，數(shù)據(jù)直接報(bào)廢。

既然這么難，有沒(méi)有“開(kāi)掛”的解決方案？

有！吉賽生物Polysome Profiling PLUS版。

為了解決傳統(tǒng)實(shí)驗(yàn)分辨率低、操作難、數(shù)據(jù)粗的痛點(diǎn)，我們推出了升級(jí)版攻略，專(zhuān)治各種不服。